Mémoires de Fin d’Etudes
Etablissement
Université de Annaba - Badji Mokhtar
Affiliation
Département de Biochimie
Auteur
MECHAI, Abdelbasset
Directeur de thèse
Kirane Djamila (Professeur)
Filière
Biochimie
Diplôme
Magister
Titre
Isolement ,caracterisation et purication de bacteriocines produites par bacteries lactiques autochtones : etudes physiologiques et biochimiques
Mots clés
???? ???? ?? ????????? ??????? ????? ????. ????????????? ???????? ???? ????? ??????? (???? ?? 100??) ? ?????? ?? ???? ???? ?? ??? pH ????? ??? 2 ? 11.
Résumé
Les bactéries lactiques jouent un rôle de premier plan dans la fabrication de produits alimentaires fermentés. Elles contribuent à l’amélioration du goût, de l’aspect et de l’innocuité microbiologique de l’aliment. Ces bactéries produisent en effet une variété de composés à action antimicrobienne tels les acides organiques, le peroxyde d’hydrogène, le diacétyl et les bactériocines. Dans le présent travail, une collection de souches lactiques a été établie, elle comprend 132 souches isolées à partir 48 échantillons de produits laitiers fermentés de façon artisanale et identifiées sur la base d’un certain nombre de caractères phénotypiques, physiologiques et biochimiques. Sur un total de 132 souches testées pour leurs activités antimicrobiennes par les deux méthodes ; de double couche et celle de diffusion en gélose, 92 sont confirmées productrices des substances antimicrobiennes, cependant la recherche de l’activité antimicrobienne dans des conditions qui éliminent l’effet des acides organiques et du peroxyde d’hydrogène a permet de cribler 5 souches bactériocinogénes appartenant aux espèces ; Lb. curvatus LB65, Lb. brevis LB93, Lb. plantarum JB44, Lc. lactis subsp. lactis RB22, et Lc. lactis subsp. lactis JB31 . Les bactériocines produites par les 5 souches sélectionnées sont de nature protéique et possèdent de larges spectres d’activité dirigée notamment contre les bactéries Gram+. Elles sont thermorésistantes (plus de 100°C) et stables dans une large gamme de pH comprise entre 2 et 11. Nous avons par ailleurs démontré que la souche Lactobacillus. curvatus LB65, produit une bactériocine dénommée curvaticine LB65. La procédure de purification de la curvaticine LB65 comporte une filtration du surnageant de culture de la souche productrice, une précipitation au sulfate d’ammonium suivie d’une dialyse, une étape de chromatographie sur résine de QAE sephadex A-25 et une HPLC sur échangeur anionique DEAE. Les étapes de purification réalisées ont permis de faire passer l’activité spécifique de la bactériocine de 16,39 à 4266,66 U.A/mg, avec un rendement final de 0.04%. Le poids moléculaire de la bactériocine a été estimé à 3,2 KDa par l’électrophorèse en SDS-PAGE et la nature protéique de la bactériocine concentrée a été confirmée par la perte de son activité à la suite d’un traitement aux protéases, elle est également thermorésistante (121°C, 10 min) et stable dans une large gamme de pH. Ces caractéristiques confèrent à la curvaticine LB65 un grand intérêt technologique dans le cas de son utilisation dans la biopréservation des aliments. jouent un rôle de premier plan dans la fabrication de produits alimentaires fermentés. Elles contribuent à l’amélioration du goût, de l’aspect et de l’innocuité microbiologique de l’aliment. Ces bactéries produisent en effet une variété de composés à action antimicrobienne tels les acides organiques, le peroxyde d’hydrogène, le diacétyl et les bactériocines Dans le présent travail, une collection de souches lactiques a été établie, elle comprend 132 souches isolées à partir 48 échantillons de produits laitiers fermentés de façon artisanale et identifiées sur la base d’un certain nombre de caractères phénotypiques, physiologiques et biochimiques. Sur un total de 132 souches testées pour leurs activités antimicrobiennes par les deux méthodes ; de double couche et celle de diffusion en gélose, 92 sont confirmées productrices des substances antimicrobiennes, cependant la recherche de l’activité antimicrobienne dans des conditions qui éliminent l’effet des acides organiques et du peroxyde d’hydrogène a permet de cribler 5 souches bactériocinogénes appartenant aux espèces ; Lb. curvatus LB65, Lb. brevis LB93, Lb. plantarum JB44, Lc. lactis subsp. lactis RB22, et Lc. lactis subsp. lactis JB31 . Les bactériocines produites par les 5 souches sélectionnées sont de nature protéique et possèdent de larges spectres d’activité dirigée notamment contre les bactéries Gram+. Elles sont thermorésistantes (plus de 100°C) et stables dans une large gamme de pH comprise entre 2 et 11. Nous avons par ailleurs démontré que la souche Lactobacillus. curvatus LB65, produit une bactériocine dénommée curvaticine LB65. La procédure de purification de la curvaticine LB65 comporte une filtration du surnageant de culture de la souche productrice, une précipitation au sulfate d’ammonium suivie d’une dialyse, une étape de chromatographie sur résine de QAE sephadex A-25 et une HPLC sur échangeur anionique DEAE. Les étapes de purification réalisées ont permis de faire passer l’activité spécifique de la bactériocine de 16,39 à 4266,66 U.A/mg, avec un rendement final de 0.04%. Le poids moléculaire de la bactériocine a été estimé à 3,2 KDa par l’électrophorèse en SDS-PAGE et la nature protéique de la bactériocine concentrée a été confirmée par la perte de son activité à la suite d’un traitement aux protéases, elle est également thermorésistante (121°C, 10 min) et stable dans une large gamme de pH. Ce
Date de soutenance
2009
Cote
574.19 MEC
Pagination
160p.
Illusatration
Fig.
Format
30 cm.
Statut
Soutenue